巨噬细胞线性溶酶体的体内和功能研究
他是丁凤池彭春雷徐春伟张一雷葛建娟王建宏
[概述]目的：溶酶体形态多样：线性溶酶体具有约数微米长的连续线性结构，被单个膜层包围。
线性溶酶体的研究主要是通过细胞化学和电子显微镜进行的，这阻止了对线性溶酶体而不是活细胞的形态和功能的全面了解。
这项研究的目的是建立一种追踪活细胞中线性溶酶体并首先研究其功能的方法。
方法：从GFP转基因小鼠中分离纯化出腹膜Mφ，并记录为Mφ-GFP。用红色的溶酶体荧光探针标记溶酶体。通过超速离心分离CT26。
来自WT细胞的外泌体用DiI荧光染料标记，并命名为Exo-DiI。
将Exo-DiI添加到Mφ-GFP培养系统中，并用共聚焦激光扫描显微镜（LSCM）进行观察。
结果：GFP荧光在pH 5和pH 7-12下稳定。
在0，荧光消失。
溶酶体的内部pH值为5。
0，由于酸性环境，GFP荧光信号关闭。
在LSCM条件下，Mφ-GFP溶酶体在胞质上呈圆形，绿色荧光阴性，呈一般绿色荧光。
用溶酶体红色荧光探针进行Mφ-GFP处理后，绿色荧光阴性染色区域在LSCM下与亮红色荧光重叠，表明绿色荧光阴性染色区域代表的区域是Mφ-溶酶体
在Mφ-GFP的部分区域中，观察到从圆形溶酶体富集区域放射状分布的线性负荧光染色区域，并且在圆形溶酶体中直接观察到线性溶酶体。细胞
在Mφ-GFP培养基中加入Exo-DiI稀释液并孵育3分钟后，在LSCM下Mφ-GFP细胞质的负荧光染色区观察到大量的Exo-DiI，呈圆形荧光红色我们表明，Mφ-GFP可以在体外培养环境中快速摄取外泌体。
温育12-18小时后，在Mφ-GFP细胞质中观察到红色线性荧光。这与GFP阴性荧光染色区一致，表明线性溶酶体与溶酶体的消化功能有关。
结论：使用Mφ-GFP可以观察到溶酶体。溶酶体的位置可以清晰地显示出来而不会被染色。LSCM提供了对活细胞内活细胞线性溶酶体形态，数量和动力学的清晰直观观察。
[作者单位]：南通市肿瘤医院肿瘤生物治疗中心[类别]：R392。
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